Преподобный Дорофей был родом из Аскалона и раннюю молодость провел с семьёй в Газе. Изучал светские науки; возможно, его учителем был Прокопий Газский. Семья Дорофея была состоятельной (в житии преподобного Досифея, ученика аввы Дорофея, сообщается, что брат Дорофея на свои средства построил в монастыре аввы Серида лечебницу). Причины, побудившие Дорофея оставить мир и уйти в монастырь, неизвестны, так же, как и возраст, в котором он принял постриг. Известно, что монашеский постриг он принял не сразу, а проживал некоторое время рядом с монастырём, используя средства своего большого наследства.

Поступив в монастырь преподобного Серида, Дорофей стал келейником святого Иоанна Пророка и был его послушником в протяжении десяти лет. Основным его послушанием в монастыре был приём странников, к которому он проявлял великое терпение и усердие. Он был наставником преподобного Досифея. Не ранее 540 года, после смерти игумена аввы Серида и святого Иоанна Пророка Дорофей удалился из общежития аввы Серида. Возможной причиной этого стало желание братии избрать его игуменом, от чего он по смирению отказался. Вскоре рядом с Дорофеем начали селиться другие монахи, и он основал собственный монастырь, настоятелем которого был до самой смерти.